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小鼠腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液

【檢驗原理】

外周血中單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞等細胞，其體積、形態(tài)和密度與其他細胞不同，紅細胞和白細胞等細胞密度較大，為 1.090 g/ml 左右，而淋巴細胞和單核細胞密度為 1.075～1.090 g/ml，血小板為 1.030～1.035 g/ml。為此，本公司將葡聚糖(右旋糖酐)和泛影酸葡甲胺按一定比例混合，調(diào)整比重、pH 值和滲透壓，經(jīng)過澄清及除菌過濾后制成一種密度在 1.077g/ml 并且近于等

滲的溶液（分層液），經(jīng)過密度梯度離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布，從而將各種血細胞加以分離。

【檢驗方法】

取新鮮抗凝血 1ml，與注射用生理鹽水 1:1 混勻后，小心加于 2ml 的細胞分離液之液面上，以 400g 離心(半徑 15cm 水平轉子)20 分鐘，此時離心管中由上下細胞分四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細胞。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。收集第二層細胞放入含注射用生理鹽水 4-5毫升的試管中，充分混勻后， 400g，離心 20 分鐘。沉淀經(jīng)反復洗 2 次即得所需細胞。(此方法效果較好，推薦使用)

【主要組成成份】

本品為帶有乳光或微乳光的注射水溶液，主要組成成份是葡聚糖（右旋糖酐）與泛影酸葡甲胺。

【儲存條件及有效期】

18-25℃避光保存，有效期 2 年。啟封后置 4℃保存，有效期 1 周。本品為真空包裝，未啟封前置于 10℃ 以下易出現(xiàn)白色結晶，影響分離效果。

【適用儀器】

 半徑 15cm 水平轉子離心機。

【樣本要求】

本分離液要求血液為新鮮的抗凝血，血液收集時應無菌操作且在儲存、處理和運輸過程中避免冷凍和冷藏。

【參考值（參考范圍）】

收集淋巴細胞的純度大于 80%。

【檢驗結果的解釋】

由于各品牌離心機的性能不同，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉數(shù)和離心的時間，摸索佳的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。

【檢驗方法的局限性】

 本試驗要求，在正常大氣壓下，樣本、分離液及分離環(huán)境溫度為 20℃± 2℃。本分離液在低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。

【產(chǎn)品性能指標】

密度 1.077 ± 0.001g/ml

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

400g，離心20 分鐘

內(nèi)毒素 ＜0.06EU/ml

無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 每 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 20 粒以下，含 25μm 以上的不溶性微粒 5 粒以下

【注意事項】

1. 啟封后應置 4℃保存，避免微生物的污染。

2. 細胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液溫度升室溫時，搖勻后使用。

3. 整個分離過程中，溫度應控制在 20℃± 2℃且在無菌環(huán)境下進行，避免微生物的污染，否則會影響分離質量。